可溶性總糖檢測(cè)｜茁彩生物

可溶性總糖是植物體內(nèi)具有重要生理功能的一類小分子碳水化合物，包括還原性糖（葡萄糖、果糖、麥芽糖等）和非還原性糖（蔗糖、棉子糖等）。作為植物能量代謝的核心物質(zhì)，可溶性糖不僅是呼吸作用的底物，還是低溫脅迫下重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)和信號(hào)分子。準(zhǔn)確測(cè)定可溶性總糖含量，對(duì)于研究植物碳代謝、抗逆生理及品質(zhì)評(píng)價(jià)具有重要意義。

可溶性糖的定義與分類

• 總糖：指樣品中所有糖類物質(zhì)的總和，包括可溶性糖和不溶性糖（如淀粉、纖維素）

• 可溶性糖：能溶于水及乙醇等極性溶劑的糖類，是本文檢測(cè)的目標(biāo)物質(zhì)

• 還原性糖：分子中含有游離醛基或酮基，能還原斐林試劑等氧化劑的糖類（如葡萄糖、果糖）

經(jīng)典測(cè)定方法與原理

蒽酮比色法（Anthrone Method）

檢測(cè)原理

• 化學(xué)反應(yīng)：糖類在濃硫酸作用下脫水生成糠醛及其衍生物，與蒽酮試劑縮合形成藍(lán)綠色復(fù)合物

• 光譜特性：最大吸收波長(zhǎng)為620nm，吸光度與糖濃度呈線性關(guān)系

• 反應(yīng)式：

糖類 + 蒽酮 → 藍(lán)綠色復(fù)合物（ε=1.1×10? L·mol?1·cm?1）

試劑配制

1. 蒽酮試劑：0.1g蒽酮溶于100mL濃硫酸（98%），現(xiàn)配現(xiàn)用

2. 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：1mg/mL（精確稱取105℃烘干的葡萄糖0.1000g，蒸餾水定容至100mL）

操作步驟

1. 樣品提取：

? 稱取0.5g鮮樣，剪碎后加入5mL 80%乙醇

? 80℃水浴提取30min，期間攪拌3次

? 4000rpm離心10min，取上清液

? 殘?jiān)?mL 80%乙醇重復(fù)提取2次，合并上清液

? 定容至25mL，即為可溶性糖提取液

2. 顯色測(cè)定：

? 取1mL提取液于試管中，加入4mL蒽酮試劑

? 沸水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)10min，立即冰浴冷卻

? 分光光度計(jì)620nm處測(cè)定吸光度

? 同時(shí)做空白對(duì)照（1mL蒸餾水+4mL蒽酮試劑）

結(jié)果計(jì)算

公式：可溶性總糖含量（mg/g FW） = (C×V×D)/(W×1000)

其中：

- C：標(biāo)準(zhǔn)曲線查得糖含量（μg）

- V：提取液總體積（mL）

- D：稀釋倍數(shù)

- W：樣品鮮重（g）

苯酚-硫酸法（Phenol-Sulfuric Acid Method）

檢測(cè)原理

• 顯色反應(yīng)：糖類與苯酚-硫酸試劑反應(yīng)生成橙黃色復(fù)合物（490nm比色）

• 反應(yīng)特點(diǎn)：

? 對(duì)游離糖和多糖均有較高靈敏度

? 顯色穩(wěn)定（2h內(nèi)吸光度變化<5%）

? 干擾物質(zhì)較少

關(guān)鍵步驟

1. 樣品提取：同蒽酮法

2. 顯色反應(yīng)：取1mL提取液，加入5%苯酚溶液1mL，混勻后快速加入5mL濃硫酸

3. 比色測(cè)定：室溫放置30min，490nm處測(cè)定吸光度

方法比較